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科研试剂盒实验中缓冲溶液等试剂的配置
更新时间:2013-08-21      阅读:1475

ELISA实验中是以抗原和抗体的免疫反应为基础,ELISA试剂盒以及各种溶液如何配置?zui近刚做了下ELISA实验,把各种ELISA配置方法汇总如下:
(1) ELISA实验包被缓冲液
(2) ELISA实验洗涤缓冲液(2) ELISA实验洗涤缓冲液
(3) ELISA实验稀释液;
(4)ELISA实验终止液
(5)ELISA底物缓冲液
(6)ELISA实验TMB
(四甲基联苯胺)使用液
(7) ELISA实验ABTS使用液
(8)ELISC。

试剂

(1) ELISA实验包被缓冲液(PH9.6 0.05M碳酸盐缓冲液):

NaHCO3 1.59克

NaHCO3  2.93克

加蒸馏水至1000ml

(2) ELISA实验洗涤缓冲液(PH7.4 PBS):0.15M

KH2PO4       0.2克

Na2HPO4·12H2O  2.9克

NaCl        8.0克

KCl         0.2克

Tween-20 0.05%  0.5ml

加蒸馏水至1000ml

(3) ELISA实验稀释液:

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗涤缓冲液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清与洗涤液配成5~10%使用。

(4)  ELISA试剂盒 实验终止液(2M H2SO4):

蒸馏水178.3ml,逐滴加入浓硫酸(98%)21.7ml。

(5) ELISA底物缓冲液(PH5.0磷酸棗柠檬酸):

0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

0.1M 柠檬酸(19.2克/L)      24.3ml

加蒸馏水50ml。

(6) ELISA实验TMB(四甲基联苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml无水乙醇) 0.5ml

底物缓冲液(PH5.5)    10ml

0.75%H2O2 32μl

(7) ELISA实验ABTS使用液:

ABTS        0.5mg

底物缓冲液(PH5.5)  1ml

3%H2O2 2μl

(8)ELISA实验封闭液:

牛血清白蛋白(BSA) 5克

加洗涤缓冲液至100ml。

值得一提的是有的封闭液中含有脱脂奶粉,不适合长期保存。

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为了保证ELISA实验的准确性,实验操作中加入的缓冲液和各组分一定要,将洗涤液加入酶标板中的时候防止加入的试剂混入另外一个酶标孔,严防交叉污染。

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