小鼠白细胞介素12(IL-12)试剂盒操作步骤
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、
待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品zui终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置 37℃温育 3 0分钟。
4.配液:将 20倍浓缩洗涤液用蒸馏水 20倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此重复 5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀, 37℃避光显色15分钟.
10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转)。
11.测定:以空白空调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度( OD值)。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
8 ng/L 5号标准品 150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
4 ng/L 4号标准品 150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液
2 ng/L 3号标准品 150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液
1 ng/L 2号标准品 150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液
0.5 ng/L 1号标准品 150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液
操作程序总结:计算
以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。
小鼠白细胞介素12(IL-12)试剂盒注意事项
1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。
2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。
3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
4.请每次测定的同时做标准曲线,做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值大于标准品孔*孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数( n倍)后再测定,计算时请zui后乘以总稀释倍数(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物请避光保存。
7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准 .
8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
9.本试剂不同批号组分不得混用。
10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。