ELISA方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定。除了盒子本身质量外，操作中很多因素都影响试验的正常结果。*常出现的问题是显色淡，灵敏度偏低、重复性不佳、假阳性结果和假阴性结果，不管出现什么样的结果，不但浪费客户的金钱、样本、精力，更重要的是对临床做出了危险判断。在这里我们分析ELISA试验非正常检测结果产生的常见原因，并探讨其解决办法，以提高检测质量。

1. 标本的采集与保存

当标本采集保存不当产生溶血时，红细胞中的血红蛋白释放到血清中，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，其通过吸附或“PP效应"

(蛋白质间相互吸附的现象)结合后，可催化、B液显色而造成假阳性标本采集保存不当致细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP，会产生假阳性反应;标本在冰箱中保存时间过长导致血清IgG聚合，易使间接法的试验本底加深。因此，标本宜在新鲜时检测。

反复冻融血清会使抗体效价跌落，所以测抗体的血清标本如需保存做多次检测，宜少里分装冻存。

2.加样

如果ELISA试验样品稀释液少加或血清多加，都会引起本底增高。对于间接法来说，受上述两个因索影响更大。因为血清中受检的特异性IgG只占IgG中的一小部分。IgG的吸附性很强，非特异性IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的夫面。这些非特异性的IgG均可以和酶标二抗发生反应而造成较高阴性本底或假阳性。如果加入的血清过多，高于规定的稀释倍数，极易造成高值阴性。反之，造成假阴性。