1、问：做直接ELISA试剂盒法检验小鼠血清中的IgE抗体，设空白对照、和阴性对照、阳性血清稀释倍数为5千、1万、10万、20万不等，用的是生物素符号的羊抗鼠IgE抗体，和亲和素的辣根过氧化物酶。但是效果除了空白对照孔没有颜色外，别的各孔全有颜色，并且OD值都相差不大，为何?
答复：也许因素如下：
(1) 水质被金属离子等污染;防止办法尽量运用新鲜水或蒸馏水。
(2) 洗刷不充沛，样品中其它成分残留或酶残留;防止办法洗刷液应注满微孔，充沛洗刷。
(3) 移液头重复运用，未洗净或消毒不*; 防止办法移液头一次性运用。
(4) 酶标板灵敏度过高。
(5) 一抗显色时间的控制等等，对于ELISA的每一步都要留心才行。
2、ELISA试剂盒加样时的防错小经验
(1)用一张写满字的纸，字越多越好，比如报纸，垫在下面，这么，加过标本的小孔看过去下面的字会变小，没加的字正常，非常简略差异。
(2)可以运用液面反光与没有加的孔加以差异
(3)在标本加完后，再把加样枪全压下，使液面发作小气泡，也可以加以差异
3、棋盘ELISA试剂盒试验的操作办法:
(1)将抗原按一定的梯度倍比稀释后，按照ELISA从上到下(或许从左到右)的次第包被。
(2)将抗体按一定的梯度倍比稀释后按照ELISA从左到右或许从上到下参加。
(3)二抗的稀释倍数是一定的，然后显色，读值。
ELISA试剂盒OD值的测守时，波长要根据显色剂的不一样而定，通常上我们都运用TMB显色，450nm读值。根据读值得效果可以选定适合的抗原和抗体效价，这即是棋盘 ELISA试剂盒试验的目的，假设抗原包被量已知而二抗的工作浓度不确定的话就用一抗和二抗作棋盘试验。